动物性食品中恩诺沙星和环丙沙星残留检测方法-高效液相色谱法

   日期:2019-06-29     来源:互联网    作者:admin    浏览:0    评论:0    
核心提示:1、方法提要或原理 试料中残留的恩诺沙星、环丙沙星用不同pH值的磷酸缓冲液提取,C18柱净化,流动相洗脱。以磷酸乙睛作为流动相,用
1、方法提要或原理
试料中残留的恩诺沙星、环丙沙星用不同pH值的磷酸缓冲液提取,C18柱净化,流动相洗脱。以磷酸乙睛作为流动相,用高效液相色谱-荧光检测法测定,外标法定量。
2、试剂和材料 
恩诺沙星、环丙沙星、磷酸、氢氧化钠、乙腈、三乙胺、磷酸二氢钾;氢氧化钠溶液5.0mol/L;氢氧化钠溶液0.03mol/L;磷酸/三乙胺溶液0.05mol/L;
磷酸盐缓冲液(用于肌肉、脂肪组织):取磷酸二氢钾6.8g,加水使溶解并稀释至500mL,用5.0mol/L氢氧化钠溶液调pH至7.0。
磷酸盐缓冲液(用于肝脏、肾脏组织):取磷酸二氢钾6.8g,加水溶解并稀释至500mL,pH为4.0;
恩诺沙星、环丙沙星标准储备液:准确称取恩诺沙星、环丙沙星对照品各50mg,用0.03mol/L氢氧化钠溶液溶解并稀释成浓度为1mg/mL的储备液,置2~8℃冰箱中保存,有效期1个月。
恩诺沙星、环丙沙星标准工作液 准确量取适量恩诺沙星、环丙沙星标准储备液,用乙腈稀释成适宜浓度的喹酸和氟甲喹标准工作溶液。
3、样品处理
提取:称取(2±0.05)g试料,置30mL匀浆杯中,加磷酸盐缓冲液10.0mL,10000r/min匀浆1min。匀浆液转入50mL聚丙烯离心管中,振荡混合5min,4000r/min离心10min,上清液转入另一25mL离心管中。用磷酸盐缓冲液10.0mL洗刀头及匀浆杯,转入50mL离心管洗残渣,搅匀,振荡,离心。合并上清液于25mL离心管中,备用。
净化:C18固相萃取柱依次用2mL甲醇、2mL水润洗,润洗完毕后,准确量取适量备用液过柱,用2mL水洗,挤干。加2.0mL流动相洗脱,挤干。收集洗脱液作为试样溶液,供高效液相色谱分析。
4、测定
标准曲线的制备:准确量取适量恩诺沙星、环丙沙星标准工作液,用流动相稀释成浓度分别为0.002,0.005,0.01,0.05,0.1,0.3,0.5μg/mL的恩诺沙星、环丙沙星标准溶液,供高效液相色谱分析。
色谱条件:色谱柱:C18250mm×4.6mm(i.d),粒径5μm,或相当者。保护柱:10GC4ODS2C18流动相:0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺-乙睛(82:18),用前过0.45μm滤膜。流速:0.8mL/min。检测波长:荧光检测器,激发波长280nm;发射波长450nm。进样量:20μL。
在上述色谱条件下,恩诺沙星、环丙沙星的保留时间分别在11 

;min和8min左右,标准溶液和试样溶液的液相色谱图见附录A中图A.1、图A.2。
空白试验:除不加试料外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作。

 
打赏
 
更多>同类资讯信息
0相关评论

推荐图文
推荐资讯信息
点击排行