黄连黄柏提取工艺的优选

   日期:2019-09-17     来源:互联网    作者:admin    浏览:5    评论:0    
核心提示:态粒黄连解毒汤出自唐朝王焘《外台秘要》。本方由黄连、黄柏、黄芩、栀子组成,为一常用的清热解毒代表方剂,有较强的苦寒清热解


态粒黄连解毒汤出自唐朝王焘《外台秘要》。本方由黄连、黄柏、黄芩、栀子组成,为一常用的清热解毒代表方剂,有较强的苦寒清热解毒功能,适用于各种急性热毒病或各种急性炎症。为方便临床用药和患者携带、服用,特制成疗效稳定、质量可靠、最小安全的黄连解毒片。黄连、黄柏中的季胺碱在煎煮过程中能与黄芩中的黄芩甙发生反应而沉淀,故将组方中的4味药材分成两组(黄连、黄柏组和黄芩、栀子组)分煎。由于黄连黄柏组水提取浸膏得率太高,达不到量小的要求,因此采用水提、干燥、粉碎,再用无水乙醇回流提取3次,每次30min,趁热过滤的工艺以达到精制目的。另外,黄连和黄柏药用的主要有效成分为季胺型生物碱,主要有小檗碱、黄连碱、药根碱、巴马汀等,而人们一般以黄连中小檗碱的含量为标准,但据报道占总季胺碱40%~70%的其它季胺碱,如黄连碱、药根碱、巴马汀等均有良好的抗菌作用。以季胺总碱的煎出量为筛选指标更为合适。因此应用L9(34)正交试验设计,以小檗碱为对照品采用离子对萃取分光光度法测定季胺总碱的含量为指标,筛选黄连黄柏的最佳提取工艺条件。1材料和仪器黄连(经鉴定为毛莨科植物黄连CoptisChinensisFranch.的干燥根茎);黄柏(经鉴定为芸香科植物黄皮树phellodendronChinenseSchneid.的干燥树皮);盐酸小檗碱标准品(中国药品生物制品检定所)。氢氧化钠(江苏华康科技公司试剂厂,AR);二氯乙烷(上海光华化学试剂厂,AR);苦味酸(广东台山化工厂,AR);磷酸氢二钾(上海化学试剂二厂,AR);UV-250紫外分光光度计(岛津公司);H66025T型超声波清洗机(无锡超声电子设备厂)。2实验方法2.1正交试验设计根据传统汤剂的提取方法以及新剂型的需要,选定煎煮时间、煎煮次数、加水量、醇提用量(无水乙醇)作为考察因素。以浸膏得率、季胺总碱含量为指标,应用L9(34)正交试验设计进行试验。因素水平安排见表1。表1考察的因素和水平因素
煎煮时间A(min)煎煮时间B(次)加水量C(倍)醇担用量D(倍)
123609012012381012102040
2.2浸膏得率的测定精密称取15.0g药材(黄连9.0g,黄柏6.0g)9份,按L9(34)正交表所列实验设计进行煎煮、滤过。合并滤液。滤液置蒸发皿中水浴浓缩,蒸干后,置80±1℃烘箱中,真空干燥,取出,置干燥器中冷却至室温,称重,计算浸膏得率。2.3季胺总碱含量测定方法2.3.1供试液的制备精密称取浸膏0.1g于100ml量瓶中,加重蒸馏水溶解并定容。再从中移取1ml,以蒸馏水定容至100ml,即为供试液。2.3.2测定方法精密吸取供试液10ml,置带塞三角烧瓶中,加pH10缓冲液5.0ml,加水33.0ml苦味酸钠2.0ml,摇匀,超声波振荡20min,精密加入二氯乙烷10.0ml,振荡3min,置分液漏斗内静置分层,以干燥滤纸滤过,以蒸馏水用同法处理所得的萃取液为空白,于360nm处测定吸收度。通过标准曲线计算即得。2.3.3标准曲线的绘制精密称取盐酸小檗碱6.9mg,加水定容至100ml。分别精密吸取标准溶液20,10,5ml,定容至100ml,为溶液A,B,C。分别精密吸取A溶液20,15,10ml,定容至100ml,为溶液D、E、F。精密吸取B液10ml,定容至100ml,为溶液G。精密吸取以上溶液及蒸馏水10.0ml,按测定方法同法处理,测定吸收值并回归。2.4验证实验根据筛选得到的最佳工艺提取3批样品,测定浸膏得率和季胺总碱含量。3&n

bsp;实验结果3.1线性生范围与标准曲线在0.69~13.80μg/ml范围内,盐酸小檗碱的线性关系良好。回归方程为:C=10.703A-0.032,r=0.9999。3.2提取工艺筛选结果正交试验筛选黄连、黄柏组提取工艺结果见表2。表2正交试验筛选黄连、黄柏组提取工艺结果试验号ABCD试验结果
3.3验证实验结果验证实验结果表明,浸膏得率和有效成分提取率均较高,其中浸膏平均得率为12.28±2.17%(g/100g),季胺总碱平均含量为5.92±1.04%(g/100g)。4讨论从表2中可以看出,对浸膏得率影响因素主次顺序为B>C>D>A。其中B因素的影响最大。直观分析结果表明最佳提取工艺组成为A3B3C3D3。对季胺总碱含量影响因素主次顺序为B>A>C>D。直观分析结果表明最佳提取工艺组成为A3B3C3D3。从表中可看出,以浸膏得率为指标得到的最佳提取工艺(A3B3C3D3),其浸膏得率和季胺总碱含量均最高。验证实验进一步证明该工艺稳定可行。因此筛选得到的最佳提取工艺为:加12倍水量,煎煮120min,共煎3次,然后干燥、粉碎,再用40倍无水乙醇回流提取3次,每次30min,趁热过滤。

 
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