重组鸡IL-2对禽流感灭活苗免疫增强作用试验

   日期:2020-01-29     来源:互联网    作者:admin    浏览:17    评论:0    
核心提示:禽流感(Aivaninfluenza,AI)是由特定亚型的禽流感病毒(Aivaninfluenzavirus,AIV)引起的禽类急性高度致死性疾病,可以对疫区养禽

禽流感(Aivaninfluenza,AI)是由特定亚型的禽流感病毒(Aivaninfluenzavirus,AIV)引起的禽类急性高度致死性疾病,可以对疫区养禽业造成毁灭性打击,某些AIV毒株还可以感染人,导致死亡,从而造成严重的经济损失并威胁社会稳定。自2003年底以来,在亚洲一些国家开始流行该病,我国许多省份也相继发生,引起我国和国际社会的高度关注。目前,我国对禽流感的防控除了暴发时的紧急处置外,主要靠疫苗免疫接种。虽然我国已经有多种疫苗上市使用,但免疫效果并不十分理想。重组白细胞介素2(IL-2)作为一种有效的免疫增强剂,已经在许多动物疾病免疫中得到验证。为了进一步探讨鸡重组IL-2对H9亚型禽流感灭活疫苗免疫调节作用,进行了本项试验。
1 材料与方法
1.1 主要试剂和材料
重组鸡IL-2由南京农业大学寄生虫教研室提供;禽流感H9亚型灭活疫苗由江苏省农业科学院畜牧兽医研究所禽病研究室馈赠;1日龄雏鸡购自南京迈皋桥种鸡场。MTT和刀豆素蛋白-A(Con-A)购自南京百赛生物公司。
1.2 方法
1.2.1 实验动物分组及免疫接种 1日龄雏鸡购自南京迈皋桥种鸡场,饲养于南京农业大学实验动物房,将动物按10只/组随机分为7组。于7日龄时,采用胸部肌肉注射方式进行免疫。疫苗对照组仅接种0.5mLAIVH9灭活苗,空白对照组未接种任何疫苗和重组IL-2蛋白,其他试验组分别接种0.5mLAIVH9灭活苗和不同剂量的IL-2。具体免疫情况见表1。
1.2.2 抗体滴度的检测 分别在免疫后1周~10周内静脉采血,分离和制备血清,采用血凝和血凝抑制试验检查检测各组中平均AIV抗体滴度。
1.2.3 数据分析 所得数据通过SpSS统计软件进行分析。
2 结果
2.1 重组IL-2对AIVH9灭活苗增强作用
结果见表2。疫苗对照组动物在免疫后体内抗体水平有所增长,但抗体的持续时间相对较短,保持抗体效价24或以上仅维持2周左右,尤其免疫后第3周(即28日龄)时,其抗体水平开始与试验组3、试验组4和试验组5抗体水平差异显著(p<0.05),但与试验组1、试验组2差异不显著(p>0.05),之后,其抗体水平与各试验组均差异显著(p<0.05)。
各试验组为同时接种不同剂量的重组IL-2蛋白和AIVH9灭活苗组,动物经免疫后,其抗体水平持续增长,多在接种后35d左右抗体水平达到高峰期,之后其抗体水平有所下降,但下降趋势相对缓慢,在接种后63d时仍然有一定水平的抗体存在。试验组1和试验组2动物在接种后63d时的抗体滴度已降到4.0以下,而试验组3、试验组4和试验组5的动物抗体滴度仍然在24.0以上,具有一定的保护力。从表2还可看出,除了试验组1和试验组2在免疫接种后第3周龄(即28日龄)抗体水平与其他试验组差异显著(p<0.05)外,其余时间段各试验组抗体效价均无差异显著(p>0.05)。试验组3、试验组4和试验组5在动物免疫接种后第63日龄时,其抗体水平仍保持在24.0以上。
表1 试验动物接种情况(略)
表2 各组鸡免疫后AIVH9HI抗体效价(略)
3 讨论
尽管疫苗在动物疾病防治方面起到重要的作用,但是鸡新城疫、鸡传染性法氏囊病、禽流感等重大疫病时有发生[1-2],这些疫病的发生可能与疫苗存在一定关系。由于灭活苗的免疫原性不强,在一定程

度上影响了免疫效果。因此,提高灭活苗的免疫效果尤为重要。提高免疫效果途径很多,其中选择合适的佐剂是一种重要的途径。传统的免疫佐剂由于存在的毒性大、副作用大、难以吸收等缺点等而使用受到局限性[3-4]。近年来发现IL-1,IL-2,GM-CSF,IFN-γ,IL-4和IL-12等细多种胞因子可作用机体活性免疫细胞,或促进其增殖与分化,或加强其活性和功能,或影响细胞内活性分子的表达[5]。因此,可用细胞因子作包括禽流感疫苗在内的多种佐剂[6-7]。尽管IL-2作疫苗的增强剂报道很多,但关于IL-2在对动物抗禽流感病毒H9型免疫保护方面,尚未见报道。
本试验使用了重组鸡IL-2蛋白作AIVH9灭活苗增强剂,从试验结果来看,鸡IL-2能够使AIVH9灭活苗高水平抗体效价维持时间较长。与仅用单一疫苗免疫相比较,机体可在较长时间内维持较高的抗体水平,达到2个月,而单疫苗免疫动物后,抗体效价维持在24.0以上仅2周左右。而试验组用重组鸡IL-2蛋白作该疫苗佐剂时,动物维持该抗体效价在24.0以上的时间可达50d左右,说明了重组鸡IL-2蛋白能够增强AIVH9灭活苗的免疫效果。崔义邦等[8]用大肠埃希菌CpGDNA作AIVH9灭活苗佐剂也取得较为理想的效果,在接种后第8周时动物仍维持高水平的抗体,其抗体效价达29。而本试验验中,各试验组动物在接种后第8周时的抗体效价维持在24.4~27.8之间,略低于已报道的结果。
本试验中选用了不同剂量的重组鸡IL-2蛋白作为佐剂,目的在于筛选合适的剂量。试验组1和试验组2在使用低剂量的重组鸡IL-2蛋白(0.01mg和0.02mg)作为佐剂,也能在较长时间内使机体维持高水平的该抗体,说明了用0.01mg重组鸡IL-2蛋白即可增强AIVH9灭活苗的抗体效价,但与试验组3,试验组4和试验组5(重组鸡IL-2蛋白用量相对较高)比较,抗体效价维持在24.0以上的时间相对缩减,它们的抗体效价下降到24.0以下的时间要提前1周左右。试验组3、试验组4和试验组5中,选用了0.04,0.06,0.1mg的重组鸡IL-2蛋白作该疫苗的佐剂的用量,实际结果表明它们组间的抗体效价动态变化并无明显差异,据此认为应该选用0.06mg~0.1mg的重组鸡IL-2蛋白作为佐剂较为合适,这主要考虑到以下两个方面问题:①佐剂有效作用量和动物个体的差异;②剂量过高是否会引起免疫耐受和减少不必要的损失等相关问题。
综上所述,重组IL-2蛋白可以有效提高AIVH9灭活疫苗的免疫效果,使用0.06mg~0.1mg重组鸡IL-2蛋白作为AIVH9灭活苗佐剂时,可取得较为理想的效果。

 
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